View source for फ्लो साइटोमेट्री

{| class="wikitable"
! colspan="2" | फ्लो साइटोमेट्री
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| '''classification''' || [[साइटोमेट्री]]
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| '''analytes''' || कोशिकाएं या कण
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| '''related''' || [[कोल्टर काउंटर]]
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'''फ्लो साइटोमेट्री''' ('''FC''') एक तकनीक है जिसका उपयोग [[कोशिका (जीव विज्ञान)|कोशिकाओं]] या कणों की आबादी की भौतिक और रासायनिक विशेषताओं का पता लगाने और उन्हें मापने के लिए किया जाता है।<ref>(March 2012). "Flow cytometry: retrospective, fundamentals and recent instrumentation". ''Cytotechnology''. 64 (2) 109–30. doi:[https://doi.org/10.1007/s10616-011-9415-0 10.1007/s10616-011-9415-0].</ref>

इस प्रक्रिया में, कोशिकाओं या कणों वाले एक नमूने को तरल में निलंबित किया जाता है और फ्लो [[साइटोमेट्री|साइटोमीटर]] उपकरण में इंजेक्ट किया जाता है। नमूने को आदर्श रूप से एक बार में एक कोशिका को लेजर बीम के माध्यम से प्रवाहित करने के लिए केंद्रित किया जाता है, जहाँ प्रकीर्णित (scattered) प्रकाश कोशिकाओं और उनके घटकों के लिए विशिष्ट होता है। कोशिकाओं को अक्सर फ्लोरोसेंट मार्करों के साथ लेबल किया जाता है ताकि प्रकाश अवशोषित हो और फिर तरंग दैर्ध्य (wavelengths) की एक बैंड में उत्सर्जित हो। हजारों कोशिकाओं की जल्दी से जांच की जा सकती है और एकत्र किए गए डेटा को कंप्यूटर द्वारा संसाधित किया जाता है।<ref>(December 2013). "Flow cytometry bioinformatics.". ''PLOS Comput Biol''. 9 (12). doi:[https://doi.org/10.1371/journal.pcbi.1003365 10.1371/journal.pcbi.1003365].</ref>

फ्लो साइटोमेट्री का नियमित रूप से बुनियादी अनुसंधान, नैदानिक अभ्यास और [[नैदानिक परीक्षणों]] (clinical trials) में उपयोग किया जाता है। फ्लो साइटोमेट्री के उपयोगों में शामिल हैं:
* [[कोशिका गणना]] (Cell counting)
* [[कोशिका छंटाई]] (Cell sorting)
* कोशिका विशेषताओं और कार्य का निर्धारण
* [[सूक्ष्मजीवों]] का पता लगाना
* [[बायोमार्कर]] का पता लगाना
* [[प्रोटीन इंजीनियरिंग]] का पता लगाना
* स्वास्थ्य विकारों जैसे [[रक्त कैंसर]] का निदान
* [[जीनोम आकार]] मापना

फ्लो साइटोमेट्री एनालाइजर एक ऐसा उपकरण है जो नमूने से मात्रात्मक डेटा प्रदान करता है। फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग करने वाले अन्य उपकरणों में सेल सॉर्टर शामिल हैं जो भौतिक रूप से अलग करते हैं और इस प्रकार उनके ऑप्टिकल गुणों के आधार पर रुचि की कोशिकाओं को शुद्ध करते हैं।

== इतिहास ==

पहला [[विद्युत प्रतिबाधा]] (Electrical impedance)-आधारित फ्लो साइटोमेट्री उपकरण, जो [[कोल्टर सिद्धांत]] का उपयोग करता था, 1953 में जारी अमेरिकी पेटेंट 2,656,508 में [[वॉलेस एच. कोल्टर]] के लिए प्रकट किया गया था। मैक फुलवाइलर आज के फ्लो साइटोमीटर - विशेष रूप से सेल सॉर्टर - के अग्रदूत के आविष्कारक थे।<ref>US</ref> फुलवाइलर ने 1965 में ''[[साइंस (जर्नल)|साइंस]]'' में अपने प्रकाशन के साथ इसे विकसित किया। पहला फ्लोरोसेंस-आधारित फ्लो साइटोमेट्री उपकरण (ICP 11) 1968 में [[मुन्स्टर विश्वविद्यालय]] के वोल्फगैंग गोहडे द्वारा विकसित किया गया था, जिसे 18 दिसंबर 1968 को पेटेंट के लिए दायर किया गया था और पहली बार 1968/69 में जर्मन डेवलपर और निर्माता Partec द्वारा Phywe AG के माध्यम से [[गोटिंगेन]] में व्यावसायीकरण किया गया था। उस समय, [[अवशोषण (विद्युत चुम्बकीय विकिरण)|अवशोषण]] विधियों को अन्य वैज्ञानिकों द्वारा [[फ्लोरोसेंस]] विधियों की तुलना में व्यापक रूप से पसंद किया जाता था। इसके तुरंत बाद, फ्लो साइटोमेट्री उपकरण विकसित किए गए, जिनमें बायो/फिजिक्स सिस्टम्स इंक (बाद में: ऑर्थो डायग्नोस्टिक्स) से साइटोफ्लोरोोग्राफ (1971), Partec से PAS 8000 (1973), [[बेक्टन डिकिंसन]] (1974) से पहला FACS (फ्लोरोसेंस-एक्टिवेटेड सेल सॉर्टिंग) उपकरण, Partec/Phywe से ICP 22 (1975) और [[कोल्टर कॉर्पोरेशन|कोल्टर]] (1977/78) से Epics शामिल थे। पहला लेबल-मुक्त उच्च-आवृत्ति [[इम्पीडेंस फ्लो साइटोमेट्री|इम्पीडेंस फ्लो साइटोमीटर]] जो पेटेंटेड माइक्रोफ्लुइडिक "लैब-ऑन-चिप" पर आधारित था, Ampha Z30, Amphasys (2012) द्वारा पेश किया गया था।

===तकनीक का नाम===
फ्लोरोसेंस-आधारित फ्लो साइटोमेट्री तकनीक का मूल नाम "पल्स साइटोफोटोमेट्री" ([[जर्मन भाषा|जर्मन]]: ''Impulszytophotometrie'') था, जो फ्लोरोसेंस-आधारित फ्लो साइटोमेट्री पर पहले पेटेंट आवेदन पर आधारित था। 1976 में पेंसाकोला (फ्लोरिडा) में स्वचालित साइटोलॉजी पर 5वें अमेरिकन इंजीनियरिंग फाउंडेशन सम्मेलन में - पहले फ्लोरोसेंस-आधारित फ्लो साइटोमीटर (1968) की शुरूआत के आठ साल बाद - "फ्लो साइटोमेट्री" नाम का सामान्य रूप से उपयोग करने पर सहमति हुई, एक ऐसा शब्द जो जल्दी ही लोकप्रिय हो गया।<ref>(2006). "Zelluläre Diagnostik". Karger Publishers. ISBN 978-3-318-01217-0.</ref>

==फ्लो साइटोमीटर==
[[File:Cytometer.svg|thumb|upright=1.25|फ्लो साइटोमीटर का योजनाबद्ध आरेख, म्यान फोकसिंग से डेटा अधिग्रहण तक।]]

आधुनिक फ्लो साइटोमीटर प्रति सेकंड हजारों कणों का "वास्तविक समय" में विश्लेषण करने में सक्षम हैं और, यदि सेल सॉर्टर के रूप में कॉन्फ़िगर किया गया है, तो वे निर्दिष्ट ऑप्टिकल गुणों वाले कणों को समान दरों पर सक्रिय रूप से अलग और पृथक कर सकते हैं। एक फ्लो साइटोमीटर एक [[माइक्रोस्कोप]] के समान है, सिवाय इसके कि, कोशिका की छवि बनाने के बजाय, फ्लो साइटोमेट्री कोशिका-दर-कोशिका आधार पर निर्दिष्ट ऑप्टिकल मापदंडों का उच्च-थ्रूपुट, स्वचालित [[मात्रात्मक विश्लेषण]] (Quantification) प्रदान करता है। ठोस [[जैविक ऊतकों]] का विश्लेषण करने के लिए, पहले एक एकल-कोशिका निलंबन तैयार किया जाना चाहिए।<ref>Reichard, Andrew; Asosingh, Kewal. (2018-12-06). [https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC6375754/ Best Practices for Preparing a Single Cell Suspension from Solid Tissues for Flow Cytometry]. ''Cytometry. Part A: The Journal of the International Society for Analytical Cytology''. 95 (2) 219–226. doi:[https://doi.org/10.1002/cyto.a.23690 10.1002/cyto.a.23690].</ref>

एक फ्लो साइटोमीटर के पांच मुख्य घटक होते हैं: एक फ्लो सेल, एक मापन प्रणाली, एक डिटेक्टर, एक प्रवर्धन प्रणाली, और संकेतों के विश्लेषण के लिए एक कंप्यूटर। फ्लो सेल में एक तरल धारा (शीथ फ्लूइड) होती है, जो कोशिकाओं को ले जाती है और संरेखित करती है ताकि वे संवेदन के लिए प्रकाश बीम के माध्यम से एक पंक्ति में गुजरें। मापन प्रणाली आमतौर पर प्रतिबाधा (या चालकता) और ऑप्टिकल प्रणालियों के मापन का उपयोग करती है - लैंप ([[पारा (तत्व)|पारा]], [[ज़ेनॉन]]); उच्च-शक्ति वाले पानी से ठंडा होने वाले लेजर ([[आर्गन लेजर|आर्गन]], [[क्रिप्टन लेजर|क्रिप्टन]], डाई लेजर); कम-शक्ति वाले हवा से ठंडा होने वाले लेजर (आर्गन (488 एनएम), रेड-HeNe (633 एनएम), ग्रीन-HeNe, HeCd (यूवी)); [[डायोड लेजर]] (नीला, हरा, लाल, बैंगनी) जिसके परिणामस्वरूप प्रकाश संकेत मिलते हैं। डिटेक्टर और एनालॉग-टू-डिजिटल रूपांतरण (ADC) प्रणाली फॉरवर्ड-स्कैटर्ड लाइट (FSC) और साइड-स्कैटर्ड लाइट (SSC) के एनालॉग मापों के साथ-साथ डाई-विशिष्ट फ्लोरोसेंस संकेतों को डिजिटल संकेतों में परिवर्तित करती है जिन्हें कंप्यूटर द्वारा संसाधित किया जा सकता है। प्रवर्धन प्रणाली [[रैखिक]] (linear) या [[लघुगणकीय पैमाने]] (logarithmic scale) की हो सकती है।

फ्लो साइटोमीटर का उपयोग करके नमूनों से डेटा एकत्र करने की प्रक्रिया को "अधिग्रहण" (acquisition) कहा जाता है। अधिग्रहण फ्लो साइटोमीटर से भौतिक रूप से जुड़े एक कंप्यूटर और साइटोमीटर के साथ डिजिटल इंटरफेस को संभालने वाले सॉफ़्टवेयर द्वारा मध्यस्थ होता है। सॉफ़्टवेयर परीक्षण किए जा रहे नमूने के लिए मापदंडों (जैसे, वोल्टेज, मुआवजा) को समायोजित करने में सक्षम है, और नमूना डेटा प्राप्त करते समय प्रारंभिक नमूना जानकारी प्रदर्शित करने में भी सहायता करता है ताकि यह सुनिश्चित हो सके कि मापदंड सही ढंग से सेट किए गए हैं। शुरुआती फ्लो साइटोमीटर सामान्य तौर पर प्रयोगात्मक उपकरण थे, लेकिन तकनीकी प्रगति ने नैदानिक और अनुसंधान दोनों उद्देश्यों के लिए विभिन्न प्रकार के उपयोगों के लिए व्यापक अनुप्रयोगों को सक्षम किया है। इन विकासों के कारण, इंस्ट्रूमेंटेशन, विश्लेषण सॉफ़्टवेयर, और अधिग्रहण में उपयोग किए जाने वाले अभिकर्मकों जैसे [[फ्लोरोसेंट लेबलिंग|फ्लोरोसेंट रूप से लेबल किए गए]] [[एंटीबॉडी]] के लिए एक बड़ा बाजार विकसित हुआ है।

आधुनिक उपकरणों में आमतौर पर कई लेजर और फ्लोरोसेंस डिटेक्टर होते हैं। एक वाणिज्यिक उपकरण के लिए वर्तमान रिकॉर्ड दस लेजर<ref>[https://www.centenary.org.au/cen_resources/resources-equipment/ Resources & Equipment]. ''Centenary Institute''.</ref> और 30 फ्लोरोसेंस डिटेक्टर हैं। लेजर और डिटेक्टरों की संख्या बढ़ाने से कई एंटीबॉडी लेबलिंग की अनुमति मिलती है, और उनके [[फेनोटाइपिक]] मार्करों द्वारा लक्षित आबादी की अधिक सटीक पहचान की जा सकती है। कुछ उपकरण व्यक्तिगत कोशिकाओं की डिजिटल छवियां भी ले सकते हैं, जिससे कोशिकाओं के भीतर या सतह पर फ्लोरोसेंट संकेत स्थान का विश्लेषण किया जा सकता है।

== हार्डवेयर ==

=== फ्लो साइटोमीटर की फ्लुइडिक्स प्रणाली ===
किसी भी फ्लो साइटोमीटर में कोशिकाओं के ऑप्टिकल गुणों को सटीक रूप से मापने के लिए कोशिकाओं का केंद्रित लेजर बीम के केंद्र से समान रूप से गुजरना आवश्यक है।<ref name=":1">(October 2017). "Guidelines for the use of flow cytometry and cell sorting in immunological studies". ''European Journal of Immunology''. 47 (10) 1584–1797. doi:[https://doi.org/10.1002/eji.201646632 10.1002/eji.201646632].</ref> फ्लुइडिक प्रणाली का उद्देश्य कोशिकाओं को एक-एक करके लेजर बीम के माध्यम से और पूरे उपकरण में ले जाना है। सेल सॉर्टिंग क्षमताओं वाले फ्लो साइटोमीटर में फ्लुइडिक्स का उपयोग सॉर्ट की गई कोशिकाओं को संग्रह ट्यूबों या कुओं (wells) में ले जाने के लिए भी किया जाता है।

==== हाइड्रोडायनामिक फोकसिंग ====
''মূল নিবন্ধ: Hydrodynamic focusing''
तरल जेट में कोशिकाओं की सटीक स्थिति के लिए, अधिकांश साइटोमीटर में हाइड्रोडायनामिक फोकसिंग का उपयोग किया जाता है।<ref name=":1" /> निलंबन (suspension) में कोशिकाएं एक बाहरी म्यान तरल (sheath fluid) से घिरी हुई उपकरण में प्रवेश करती हैं। नमूना कोर (sample core) को म्यान तरल के केंद्र में बनाए रखा जाता है। नमूना इनपुट दर या लेजर इंटरोगेशन के माध्यम से प्रवाहित होने वाली कोशिकाओं की मात्रा को नमूना कोर पर म्यान तरल के दबाव द्वारा नियंत्रित किया जा सकता है। इष्टतम परिस्थितियों में, केंद्रीय तरल धारा और म्यान तरल आपस में नहीं मिलते हैं।

==== ध्वनिक-सहायता प्राप्त हाइड्रोडायनामिक फोकसिंग ====
हाइड्रोडायनामिक फोकसिंग का समर्थन करने के लिए कुछ फ्लो साइटोमीटर में ध्वनिक फोकसिंग (acoustic focusing) तकनीक का उपयोग किया जाता है।<ref name=":1" /> ध्वनिक तरंगें (>2 MHz) म्यान तरल में प्रवेश से पहले नमूने को प्री-फोकस करती हैं। प्री-फोकस्ड नमूने को फिर हाइड्रोडायनामिक कोर में इंजेक्ट किया जाता है और उपकरण के माध्यम से प्रवाहित किया जाता है। यह उच्च नमूना इनपुट दरों के तहत डेटा सटीकता बढ़ाने में मदद कर सकता है।

=== प्रकाशिकी और इलेक्ट्रॉनिक्स ===

==== ऑप्टिकल फिल्टर ====
[[फ्लोरोफोर]] (fluorophores) से उत्सर्जित प्रकाश तरंग दैर्ध्य (wavelengths) के एक स्पेक्ट्रम में होता है, इसलिए कई फ्लोरोफोरस को मिलाने से ओवरलैप हो सकता है। विशिष्टता जोड़ने के लिए, [[ऑप्टिकल फिल्टर]] और [[डाइक्रोइक मिरर]] (dichroic mirrors) का उपयोग प्रकाश को फिल्टर करने और उसे [[फोटोमल्टीप्लायर ट्यूब]] (PMTs) या [[एवलान्च फोटोडायोड]] (APD) जैसे डिटेक्टरों तक ले जाने के लिए किया जाता है।<ref name=":1" /> ऑप्टिकल फिल्टर को बैंड पास (BP), लॉन्ग पास (LP), या शॉर्ट पास (SP) फिल्टर के रूप में डिज़ाइन किया गया है। अधिकांश फ्लो साइटोमीटर ऑप्टिकल स्पेक्ट्रम के विशिष्ट बैंड का चयन करने के लिए डाइक्रोइक मिरर और बैंड पास फिल्टर का उपयोग करते हैं।

==== प्रिज्म, ग्रेटिंग और स्पेक्ट्रल फ्लो साइटोमेट्री ====
स्पेक्ट्रल फ्लो साइटोमेट्री एक डिटेक्टर सरणी (detector array) में मार्कर के उत्सर्जित प्रकाश को फैलाने के लिए [[प्रिज्म (ऑप्टिक्स)|प्रिज्म]] या [[विवर्तन ग्रेटिंग]] (diffraction gratings) का उपयोग करती है।<ref name=":1" /> यह प्रत्येक कण से पूर्ण स्पेक्ट्रा को मापने की अनुमति देता है। एकल कोशिकाओं से मापे गए स्पेक्ट्रा को बाद में उपयोग किए गए सभी रंगों के संदर्भ स्पेक्ट्रा और ऑटोफ्लोरोसेंस स्पेक्ट्रम का उपयोग करके अनमिक्स (unmix) किया जाता है। यह व्यापक पैनल डिज़ाइन और नए जैविक मार्करों के अनुप्रयोग की अनुमति दे सकता है।

==== इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री ====
इमेजिंग फ्लो साइटोमेट्री (IFC) कोशिकाओं की मल्टीचैनल छवियां कैप्चर करती है।<ref name=":1" /> इमेजिंग प्लेटफॉर्म में उपयोग किए जाने वाले डिटेक्टरों को व्यक्तिगत कोशिकाओं की छवियों को कैप्चर करने के लिए [[चार्ज-कपल्ड डिवाइस]] (CCD) या कॉम्प्लीमेंट्री मेटल-ऑक्साइड-सेमीकंडक्टर (CMOS) से सुसज्जित किया जा सकता है।

==डेटा विश्लेषण==
''মূল নিবন্ধ: Flow cytometry bioinformatics''

=== क्षतिपूर्ति (Compensation) ===
''মূল নিবন্ধ: Compensation (cytometry)''
प्रत्येक फ्लोरोक्रोम का एक व्यापक प्रतिदीप्ति (fluorescence) स्पेक्ट्रम होता है। जब एक से अधिक फ्लोरोक्रोम का उपयोग किया जाता है, तो फ्लोरोक्रोम के बीच ओवरलैप हो सकता है। इस स्थिति को स्पेक्ट्रम ओवरलैप कहा जाता है, और इसे ठीक किया जाना चाहिए। उदाहरण के लिए, FITC और PE के लिए उत्सर्जन स्पेक्ट्रम ऐसा है जिसमें फ्लोरेसिन द्वारा उत्सर्जित प्रकाश उसी तरंग दैर्ध्य को ओवरलैप करता है जो PE के लिए उपयोग किए जाने वाले फिल्टर से गुजरता है। इस स्पेक्ट्रल ओवरलैप को PE संकेतों से FITC संकेत के एक हिस्से को हटाकर या इसके विपरीत ठीक किया जाता है। इस प्रक्रिया को रंग क्षतिपूर्ति (color compensation) कहा जाता है, जो स्वयं को मापने के लिए फ्लोरोक्रोम की गणना प्रतिशत के रूप में करती है।<ref name=":0">(November 2001). "Spectral compensation for flow cytometry: visualization artifacts, limitations, and caveats". ''Cytometry''. 45 (3) 194–205. doi:[https://doi.org/10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c 10.1002/1097-0320(20011101)45:3<194::aid-cyto1163>3.0.co;2-c].</ref>

क्षतिपूर्ति वह गणितीय प्रक्रिया है जिसके द्वारा मल्टीपैरामीटर फ्लो साइटोमेट्रिक डेटा के स्पेक्ट्रल ओवरलैप को ठीक किया जाता है। चूंकि फ्लोरोक्रोम में व्यापक स्पेक्ट्रम हो सकते हैं, वे ओवरलैप कर सकते हैं, जिससे डेटा के विश्लेषण के दौरान भ्रम का अवांछनीय परिणाम हो सकता है। यह ओवरलैप, जिसे स्पिलओवर के रूप में जाना जाता है और स्पिलओवर गुणांक में मापा जाता है, आमतौर पर एक निश्चित फ्लोरोक्रोम के लिए डिटेक्टरों के कारण होता है जो एक अलग फ्लोरोक्रोम से तरंग दैर्ध्य में एक महत्वपूर्ण शिखर को मापता है। इस सुधार को करने के लिए सबसे अधिक रैखिक बीजगणित (linear algebra) का उपयोग किया जाता है।<ref name=":0" />

सामान्य तौर पर, जब एक या अधिक मापदंडों के ग्राफ प्रदर्शित किए जाते हैं, तो यह दिखाने के लिए होता है कि अन्य मापदंड दिखाए गए वितरण में योगदान नहीं करते हैं। विशेष रूप से जब उन मापदंडों का उपयोग किया जाता है जो दोगुने से अधिक होते हैं, तो यह समस्या अधिक गंभीर होती है। वर्तमान में, बहुआयामी मापदंडों को कुशलतापूर्वक प्रदर्शित करने के लिए कोई उपकरण नहीं खोजा गया है। कोशिकाओं के बीच अंतर देखने के लिए क्षतिपूर्ति बहुत महत्वपूर्ण है।
[[File:Picoplancton cytometrie.jpg|thumb|upright=1.25|right|फ्लो साइटोमेट्री द्वारा [[प्रकाश संश्लेषण|प्रकाश संश्लेषक]] [[पिकोप्लैंकटन]] के समुद्री नमूने का विश्लेषण, जिसमें तीन अलग-अलग आबादी (''[[Prochlorococcus]]'', ''[[Synechococcus]]'', और [[पिकोयूकेरियोट्स]]) दिखाई दे रही हैं।]]

===गेटिंग (Gating)===
[[File:Flow cytometric gating by side scatter and CD45.png|thumb|सामान्य वितरण के मामले में, [[साइड स्कैटर]] और [[PTPRC|CD45]] द्वारा [[रक्त कोशिका]]ओं की मुख्य श्रेणियों में फ्लो साइटोमेट्री गेटिंग।]]
फ्लो साइटोमीटर द्वारा उत्पन्न डेटा को [[हिस्टोग्राम]] बनाने के लिए एक [[आयाम]] (dimension) में, या द्वि-आयामी डॉट प्लॉट में, या तीन आयामों में भी प्लॉट किया जा सकता है। इन प्लॉटों पर क्षेत्रों को प्रतिदीप्ति [[तीव्रता (भौतिकी)|तीव्रता]] के आधार पर, उप-सेट निष्कर्षण की एक श्रृंखला बनाकर क्रमिक रूप से अलग किया जा सकता है, जिसे "गेट्स" कहा जाता है। नैदानिक और चिकित्सीय उद्देश्यों के लिए विशिष्ट गेटिंग [[चिकित्सा दिशानिर्देश|प्रोटोकॉल]] मौजूद हैं, विशेष रूप से [[हेमेटोलॉजी]] के संबंध में। व्यक्तिगत एकल कोशिकाओं को अक्सर संकीर्ण रूप से केंद्रित लेजर बीम के माध्यम से उनके "टाइम-ऑफ-फ्लाइट" (जिसे "पल्स-विड्थ" के रूप में भी जाना जाता है) द्वारा सेल डबलेट्स या उच्च समुच्चय से अलग किया जाता है।<ref>(1975). "Flow cytofluorimetry: discrimination between single cells and cell aggregates by direct size measurements". ''Acta Cytologica''. 19 (6) 577–81.</ref>

प्लॉट अक्सर लॉगरिदमिक (logarithmic) पैमानों पर बनाए जाते हैं। चूंकि विभिन्न फ्लोरोसेंट रंगों (fluorescent dyes) के उत्सर्जन स्पेक्ट्रम ओवरलैप होते हैं,<ref name="auto">[http://www.thefcn.org/flow-fluorochromes Fluorochrome Table (Tools)]. ''Flow Cytometry Network''.</ref> इसलिए डिटेक्टरों पर प्राप्त संकेतों को इलेक्ट्रॉनिक और कम्प्यूटेशनल दोनों तरह से क्षतिपूर्ति (compensated) करना पड़ता है। फ्लो साइटोमीटर का उपयोग करके एकत्रित डेटा का विश्लेषण सॉफ्टवेयर का उपयोग करके किया जा सकता है। एक बार डेटा एकत्र हो जाने के बाद, फ्लो साइटोमीटर से जुड़े रहने की आवश्यकता नहीं होती है और विश्लेषण अक्सर एक अलग कंप्यूटर पर किया जाता है। यह विशेष रूप से उन कोर सुविधाओं में आवश्यक है जहां इन मशीनों का उपयोग बहुत अधिक मांग में होता है।

=== कम्प्यूटेशनल विश्लेषण ===

कम्प्यूटेशनल विधियों का उपयोग करके स्वचालित जनसंख्या पहचान (automated population identification) पर हालिया प्रगति ने पारंपरिक गेटिंग रणनीतियों का एक विकल्प प्रदान किया है। स्वचालित पहचान प्रणालियां दुर्लभ और छिपी हुई आबादी की खोज में संभावित रूप से मदद कर सकती हैं। प्रतिनिधि स्वचालित विधियों में इम्यूनोलॉजी डेटाबेस और विश्लेषण पोर्टल (ImmPort) में FLOCK,<ref>(2010). "Elucidation of seventeen human peripheral blood B-cell subsets and quantification of the tetanus response using a density-based method for the automated identification of cell populations in multidimensional flow cytometry data". ''Cytometry Part B''. 78 (Suppl 1) S69-82. doi:[https://doi.org/10.1002/cyto.b.20554 10.1002/cyto.b.20554].</ref> [[Bioconductor]] में SamSPECTRAL और flowClust, तथा [[GenePattern]] में FLAME शामिल हैं। T-डिस्ट्रिब्यूटेड स्टोकेस्टिक नेबर एम्बेडिंग (tSNE) एक एल्गोरिदम है जिसे [[आयामी कमी]] (dimensionality reduction) करने के लिए डिज़ाइन किया गया है, ताकि जटिल बहु-आयामी डेटा को द्वि-आयामी "मानचित्र" में देखा जा सके। सहयोगात्मक प्रयासों के परिणामस्वरूप FlowCAP (फ्लो साइटोमेट्री: क्रिटिकल असेसमेंट ऑफ पॉपुलेशन आइडेंटिफिकेशन मेथड्स) नामक एक ओपन प्रोजेक्ट शुरू हुआ है, जिसका उद्देश्य फ्लो साइटोमेट्री डेटा क्लस्टरिंग विधियों की तुलना और मूल्यांकन करने के लिए एक निष्पक्ष तरीका प्रदान करना है, और इन विधियों के उचित उपयोग और अनुप्रयोग के बारे में मार्गदर्शन स्थापित करना है।

=== FMO नियंत्रण ===
फ्लोरेसेंस माइनस वन (FMO) नियंत्रण डेटा व्याख्या के लिए महत्वपूर्ण हैं जब मल्टी-कलर पैनल बनाए जाते हैं – जिसमें एक कोशिका को एक साथ कई फ्लोरोक्रोम के साथ रंगा जाता है। FMO नियंत्रण एक दिए गए चैनल में फ्लोरेसेंस स्पिलओवर का माप प्रदान करते हैं और क्षतिपूर्ति (compensation) की अनुमति देते हैं। FMO नियंत्रण उत्पन्न करने के लिए, एक नमूने को उन सभी फ्लोरोक्रोम के साथ रंगा जाता है सिवाय उस एक के जिसका परीक्षण किया जा रहा है – इसका मतलब है कि यदि आप 4 अलग-अलग फ्लोरोक्रोम का उपयोग कर रहे हैं तो आपके FMO नियंत्रण में उनमें से केवल 3 होने चाहिए (उदाहरण: फ्लोरोक्रोम – A, B, C, D; FMOs – ABC_, AB_D, A_CD, _BCD)।

== फ्लो साइटोमेट्री द्वारा कोशिका छंटाई (Cell sorting) ==
[[कोशिका छंटाई]] (Cell sorting) विशिष्ट भौतिक विशेषताओं की उपस्थिति या अनुपस्थिति के आधार पर कोशिका आबादी को शुद्ध करने की एक विधि है।<ref name=":1" /> छंटाई क्षमताओं वाले फ्लो साइटोमीटर में, उपकरण कोशिका के आकार, आकृति विज्ञान (morphology) और प्रोटीन अभिव्यक्ति सहित मापदंडों का उपयोग करके कोशिकाओं का पता लगाता है, और फिर कोशिकाओं को छांटने और प्रयोगात्मक उपयोग के बाद उपसमूहों को पुनः प्राप्त करने के लिए ड्रॉपलेट तकनीक का उपयोग करता है।

पहला प्रोटोटाइप सॉर्टर 1965 में [[लॉस एलामोस नेशनल लेबोरेटरी]] (LANL) में भौतिक विज्ञानी मैक जे. फुलवाइलर द्वारा बनाया गया था, जिसमें उन्होंने एक कोल्टर वॉल्यूम सेंसर को नए आविष्कार किए गए इंक जेट प्रिंटर के साथ जोड़ा था।<ref>(1991). [https://siarchives.si.edu/collections/siris_arc_217722 Record Unit 9554, The History of the Cell Sorter Interviews]. ''Smithsonian Institution Archives''.</ref> लाइव सेल सॉर्टर या फ्लोरेसेंस-एक्टिवेटेड सेल सॉर्टर (FACS)<ref group="note">1=FACS संक्षिप्त नाम BD बायोसाइंसेज-इम्युनोसाइटोमेट्री सिस्टम्स, जो बेक्टन-डिकिंसन का एक प्रभाग है, द्वारा ट्रेडमार्क और स्वामित्व में है, जिसने स्टैनफोर्ड के पेटेंट को लाइसेंस दिया था।</ref> को [[लियोनार्ड हर्ज़ेनबर्ग|लेन हर्ज़ेनबर्ग]] द्वारा बनाया गया था, जिन्होंने बाद में अपने मौलिक कार्य के लिए 2006 में [[क्योटो पुरस्कार]] जीता।

[[File:Fluorescence Assisted Cell Sorting (FACS) B.jpg|thumb|upright=1.25|Cell Sorting Using Flow Cytometry and Droplet Technology|alt=]]फ्लो साइटोमेट्री सेल सॉर्टर्स में फ्लो साइटोमेट्री एनालाइजर से अलग एक संग्रह प्रणाली होती है। संग्रह प्रक्रिया तब शुरू होती है जब एक नमूने को म्यान द्रव (sheath fluid) की एक धारा में इंजेक्ट किया जाता है जो फ्लो सेल और लेजर इंटरसेप्ट से होकर गुजरती है।<ref>[http://flowcytometry.utoronto.ca/cell-sorting/ Cell Sorting – Faculty of Medicine Flow Cytometry Facility]. ''flowcytometry.utoronto.ca''.</ref> धारा फिर कोशिका को एक कंपन करने वाले नोजल के माध्यम से ले जाती है जो बूंदें उत्पन्न करता है, जिनमें से अधिकांश में या तो एक कोशिका होती है या कोई कोशिका नहीं होती। एक विद्युत चार्जिंग रिंग ठीक उस बिंदु पर रखी जाती है जहां धारा बूंदों में टूटती है और फ्लोरेसेंस तीव्रता मापे जाने से ठीक पहले रिंग पर एक [[विद्युत आवेश|आवेश]] (charge) लगाया जाता है; जैसे ही बूंद धारा से अलग होती है, विपरीत आवेश उस पर फंस जाता है और इस प्रकार बूंदें आवेशित हो जाती हैं। आवेशित बूंदें फिर एक [[इलेक्ट्रोस्टैटिक डिफ्लेक्शन]] प्रणाली के माध्यम से गिरती हैं जो बूंदों को उनके आवेश के आधार पर कंटेनरों में मोड़ देती है। कुछ प्रणालियों में, आवेश सीधे धारा पर लगाया जाता है, और अलग होने वाली बूंद धारा के समान संकेत का आवेश बनाए रखती है। बूंद के अलग होने के बाद धारा को वापस तटस्थ (neutral) कर दिया जाता है। संग्रह के बाद, इन कोशिकाओं को आगे संवर्धित (cultured), हेरफेर और अध्ययन किया जा सकता है।

== लेबल ==
[[File:Flow-FISH 1.JPG|thumb|upright=1.25|Use of flow cytometry to measure copy number variation of a specific DNA sequence ([[Flow-FISH]])]]फ्लो साइटोमेट्री पहचान या भौतिक गुणों के मात्रात्मक माप के लिए कोशिकाओं या कणों से बिखरे हुए प्रकाश गुणों का उपयोग करती है। लेबल, डाई और स्टेन का उपयोग बहु-पैरामीट्रिक विश्लेषण (एक कोशिका के बारे में अधिक गुणों को समझना) के लिए किया जा सकता है। [[इम्युनोफेनोटाइपिंग]] (Immunophenotyping) लेबल किए गए [[एंटीबॉडी|एंटीबॉडी]]<ref>[https://www.drmr.com/abcon/index.html Conjugation of monoclonal antibodies]. ''www.drmr.com''.</ref> और अन्य फ्लोरोफोर युक्त अभिकर्मकों जैसे डाई और स्टेन का उपयोग करके कोशिकाओं की विषम आबादी का विश्लेषण है।

=== फ्लोरोसेंट लेबल ===
''মূল নিবন্ধ: Fluorophore''
फ्लो साइटोमेट्री में लेबल के रूप में फ्लोरोफोरस की एक विस्तृत श्रृंखला का उपयोग किया जा सकता है।<ref name="auto"/> फ्लोरोफोरस, या केवल "फ्लुअर्स", आमतौर पर एक एंटीबॉडी से जुड़े होते हैं जो कोशिका पर या उसके अंदर एक लक्ष्य विशेषता को पहचानते हैं; वे [[कोशिका झिल्ली]] या किसी अन्य कोशिकीय संरचना के लिए आत्मीयता वाले रासायनिक इकाई से भी जुड़े हो सकते हैं। प्रत्येक फ्लोरोफोर में एक विशिष्ट पीक [[उत्तेजित अवस्था|उत्तेजना]] (excitation) और [[उत्सर्जन (विद्युत चुम्बकीय विकिरण)|उत्सर्जन]] (emission) तरंग दैर्ध्य होती है, और उत्सर्जन स्पेक्ट्रम अक्सर ओवरलैप होते हैं। नतीजतन, उपयोग किए जा सकने वाले लेबल का संयोजन फ्लोरोक्रोम को उत्तेजित करने के लिए उपयोग किए जाने वाले लैंप या लेजर की तरंग दैर्ध्य और उपलब्ध डिटेक्टरों पर निर्भर करता है। फ्लो साइटोमेट्री फ्लोरेसेंस का उपयोग एक मात्रात्मक उपकरण के रूप में करती है; फ्लो साइटोमेट्री की अत्यधिक संवेदनशीलता अन्य फ्लोरोसेंट डिटेक्शन प्लेटफॉर्म जैसे कि [[कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी]] से बेजोड़ है। [[कॉन्फोकल माइक्रोस्कोपी]] में पूर्ण फ्लोरेसेंस संवेदनशीलता आमतौर पर कम होती है क्योंकि आउट-ऑफ-फोकस संकेतों को कॉन्फोकल ऑप्टिकल सिस्टम द्वारा अस्वीकार कर दिया जाता है और क्योंकि छवि को कोशिका के हर स्थान पर व्यक्तिगत माप से क्रमिक रूप से बनाया जाता है, जिससे संकेत एकत्र करने के लिए उपलब्ध समय कम हो जाता है।

=== क्वांटम डॉट्स ===
[[क्वांटम डॉट]]s का उपयोग कभी-कभी उनके संकीर्ण उत्सर्जन चोटियों (narrower emission peaks) के कारण पारंपरिक फ्लोरोफोरस के स्थान पर किया जाता है।

=== आइसोटोप लेबलिंग ===
''মূল নিবন্ধ: Mass cytometry''
मास साइटोमेट्री एंटीबॉडी से जुड़े [[लैंथेनाइड]] आइसोटोप का उपयोग करके फ्लोरोसेंट लेबलिंग सीमा को पार करती है। यह विधि सैद्धांतिक रूप से 40 से 60 विशिष्ट लेबल के उपयोग की अनुमति दे सकती है और इसे 30 लेबल के लिए प्रदर्शित किया गया है।<ref name="JIM2010">(September 2010). "Highly multiparametric analysis by mass cytometry". ''Journal of Immunological Methods''. 361 (1–2) 1–20. doi:[https://doi.org/10.1016/j.jim.2010.07.002 10.1016/j.jim.2010.07.002].</ref> मास साइटोमेट्री मौलिक रूप से फ्लो साइटोमेट्री से अलग है: कोशिकाओं को एक [[प्लाज्मा (भौतिकी)|प्लाज्मा]] में पेश किया जाता है, आयनित किया जाता है, और संबंधित आइसोटोप को [[टाइम-ऑफ-फ्लाइट मास स्पेक्ट्रोमेट्री]] के माध्यम से मापा जाता है। हालांकि यह विधि बड़ी संख्या में लेबल के उपयोग की अनुमति देती है, लेकिन वर्तमान में इसकी थ्रूपुट क्षमता फ्लो साइटोमेट्री की तुलना में कम है। यह विश्लेषण की गई कोशिकाओं को नष्ट भी कर देती है, जिससे सॉर्टिंग द्वारा उनकी रिकवरी असंभव हो जाती है।

== साइटोमेट्रिक बीड ऐरे ==
प्रतिदीप्त एंटीबॉडी (fluorescent antibodies) के माध्यम से व्यक्तिगत कोशिकाओं को लेबल और पहचानने की क्षमता के अलावा, साइटोकाइन्स, प्रोटीन और अन्य कारकों जैसे कोशिकीय उत्पादों को भी मापा जा सकता है। [[ELISA]] सैंडविच परख के समान, साइटोमेट्रिक बीड ऐरे ([[Immunoassay|CBA]]) परख कई बीड आबादी का उपयोग करती है, जो आमतौर पर आकार और प्रतिदीप्ति तीव्रता के विभिन्न स्तरों द्वारा विभेदित होती हैं, ताकि एक ही परख में कई एनालाइट्स (analytes) के बीच अंतर किया जा सके। कैप्चर किए गए एनालाइट की मात्रा का पता प्रोटीन के द्वितीयक एपिटोप के विरुद्ध बायोटिनिलेटेड एंटीबॉडी के माध्यम से लगाया जाता है, जिसके बाद स्ट्रेप्टाविडिन-आर-फाइकोएरिथ्रिन (streptavidin-R-phycoerythrin) उपचार किया जाता है। बीड्स पर आर-फाइकोएरिथ्रिन की प्रतिदीप्ति तीव्रता को 488 nm उत्तेजना स्रोत से लैस फ्लो साइटोमीटर पर मापा जाता है। नमूनों में रुचि के प्रोटीन की सांद्रता को एनालाइट की ज्ञात सांद्रता के क्रमिक तनुकरण (serial dilution) से उत्पन्न मानक वक्र (standard curve) के प्रतिदीप्ति संकेतों की तुलना करके प्राप्त किया जा सकता है। इसे आमतौर पर साइटोकाइन बीड ऐरे (CBA) के रूप में भी जाना जाता है।

== इम्पीडेंस फ्लो साइटोमेट्री ==
[[Electrical impedance|इम्पीडेंस]]-आधारित एकल कोशिका विश्लेषण प्रणालियों को आमतौर पर [[Coulter counter|कोल्टर काउंटर]] के रूप में जाना जाता है। वे लगभग किसी भी प्रकार की कोशिकाओं और कणों की गिनती और आकार मापने के लिए एक सुस्थापित विधि का प्रतिनिधित्व करते हैं। इस लेबल-मुक्त तकनीक को हाल ही में "[[lab-on-a-chip|लैब-ऑन-ए-चिप]]" आधारित दृष्टिकोण द्वारा और स्थिर [[direct current|डायरेक्ट करंट]] (DC) या कम आवृत्ति वाले AC क्षेत्र के बजाय रेडियो आवृत्ति रेंज (100 kHz से 30 MHz) में उच्च आवृत्ति वाले [[alternating current|अल्टरनेटिंग करंट]] (AC) को लागू करके उन्नत किया गया है।<ref>(April 2010). "Single-cell microfluidic impedance cytometry: a review". ''Microfluidics and Nanofluidics''. 8 (4) 423–443. doi:[https://doi.org/10.1007/s10404-010-0580-9 10.1007/s10404-010-0580-9].</ref> यह पेटेंट तकनीक अत्यधिक सटीक कोशिका विश्लेषण की अनुमति देती है और झिल्ली [[capacitance|धारिता]] और [[Viability assay|जीवनक्षमता]] जैसी अतिरिक्त जानकारी प्रदान करती है। अपेक्षाकृत छोटा आकार और मजबूती इसे बैटरी से चलने वाले ऑन-साइट उपयोग के लिए उपयुक्त बनाती है।

== मापने योग्य पैरामीटर ==
section

कोशिकीय विश्लेषण और फ्लो साइटोमेट्री में मापने योग्य कारकों में लक्षणों और संकेतकों का एक विविध समूह शामिल है जो कोशिका जीव विज्ञान और कार्यप्रणाली में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। फ्लो साइटोमेट्री तकनीकें इन कारकों को परिमाणित और मूल्यांकित कर सकती हैं, जिससे शोधकर्ताओं को कोशिकाओं के विभिन्न पहलुओं की जांच और विश्लेषण करने की अनुमति मिलती है। यहाँ कुछ महत्वपूर्ण परिमाणनीय पैरामीटर दिए गए हैं जिनकी अक्सर जांच की जाती है:
* एपोप्टोसिस (Apoptosis): एपोप्टोसिस को डीएनए विनाश, माइटोकॉन्ड्रियल झिल्ली क्षमता, पारगम्यता परिवर्तन और कैस्पेज़ गतिविधि को मापकर फ्लो साइटोमेट्री द्वारा परिमाणित किया जा सकता है। ये माप नियोजित कोशिका मृत्यु के बारे में महत्वपूर्ण विवरण प्रकट करते हैं।
* कोशिका आसंजन (Cell adherence): फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग कोशिका आसंजन की जांच के लिए किया जा सकता है, जैसे कि रोगजनक-मेजबान कोशिका आसंजन। शोधकर्ता विशेष मार्करों या प्रतिदीप्त टैग का उपयोग करके कोशिका आसंजन घटनाओं को परिमाणित और विश्लेषण कर सकते हैं।
* कोशिका वर्णक (Cell pigments): क्लोरोफिल और फाइकोएरिथ्रिन कुछ कोशिकाओं में पाए जाने वाले वर्णक हैं। इन वर्णकों की उपस्थिति और मात्रा को फ्लो साइटोमेट्री द्वारा मापा जा सकता है, जो कोशिकीय चयापचय और शारीरिक अवस्थाओं के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं।
* कोशिका सतह एंटीजन: फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग अक्सर कोशिका सतह एंटीजन की पहचान और परिमाणन के लिए किया जाता है, जिन्हें क्लस्टर ऑफ डिफरेंशिएशन (CD) मार्कर के रूप में भी जाना जाता है। शोधकर्ता कोशिकाओं को विशिष्ट एंटीबॉडी के साथ लेबल करके सतह एंटीजन अभिव्यक्ति के आधार पर कोशिका आबादी को वर्गीकृत कर सकते हैं।
[[File:Flow cytometric viability by 7-AAD.png|thumb|[[7-Aminoactinomycin D]] (7-AAD) का उपयोग करते हुए फ्लो साइटोमेट्री, जिसमें कम संकेत व्यवहार्य कोशिकाओं को इंगित करता है। इसलिए, यह मामला अच्छी जीवनक्षमता दिखाता है।]]
* कोशिका जीवनक्षमता (Cell viability): फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग प्रतिदीप्त रंजक या मार्करों का उपयोग करके कोशिका [[viability assay|जीवनक्षमता परख]] के रूप में किया जा सकता है जो जीवित और मृत कोशिकाओं के बीच अंतर करते हैं। यह पैरामीटर कोशिका स्वास्थ्य और प्रयोगात्मक या चिकित्सीय सेटिंग्स के प्रति प्रतिक्रिया निर्धारित करने में महत्वपूर्ण है। फ्लो साइटोमेट्री में कोशिकाओं की जीवनक्षमता लगभग 95% होनी चाहिए, लेकिन 90% से कम नहीं।<ref>[https://medicine.yale.edu/immuno/flowcore/protocols/analysis/ Flow cytometry (FACS) staining protocol (Cell surface staining)]. ''Yale School of Medicine – Yale Flow Cytometry''.</ref>
* परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाएं (Circulating tumor cells): रक्त के नमूनों से परिसंचारी ट्यूमर कोशिकाओं (CTCs) को अलग करने और शुद्ध करने के लिए फ्लो साइटोमेट्री आवश्यक है। CTCs को विशिष्ट मार्करों या विशेषताओं को लक्षित करके खोजा और जांचा जा सकता है, जो कैंसर निदान, पूर्वानुमान और उपचार निगरानी में सहायता करते हैं।
* मल्टीड्रग रेजिस्टेंस (MDR) का लक्षण वर्णन: फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग कैंसर कोशिकाओं में मल्टीड्रग रेजिस्टेंस (MDR) को लक्षित करने के लिए किया जा सकता है, जिसमें प्रतिदीप्त रंजक या दवा प्रतिरोध तंत्र से जुड़े विशिष्ट मार्करों के बहिर्वाह (efflux) का आकलन किया जाता है। यह ज्ञान कैंसर के उपचार में दवा प्रतिरोध को समझने और उससे लड़ने में मदद करता है।
* गुणसूत्र विश्लेषण और छंटाई (Chromosome analysis and sorting): फ्लो साइटोमेट्री गुणसूत्र विश्लेषण और छंटाई में मदद कर सकती है, जिससे पुस्तकालयों का निर्माण और विशिष्ट गुणसूत्रों या गुणसूत्र संबंधी असामान्यताओं की पहचान संभव हो पाती है।
* डीएनए कॉपी संख्या भिन्नता: डीएनए कॉपी संख्या भिन्नता को फ्लो-फिश (Flow-FISH) या BACs-on-Beads तकनीक जैसी फ्लो साइटोमेट्री तकनीकों का उपयोग करके मापा जा सकता है। ये तकनीकें कैंसर जैसी बीमारियों से जुड़े आनुवंशिक परिवर्तनों पर प्रकाश डालती हैं।
* प्रोटीन अभिव्यक्ति और संशोधन: प्रतिदीप्त रूप से लेबल किए गए एंटीबॉडी या प्रोब का उपयोग करके, फ्लो साइटोमेट्री प्रोटीन अभिव्यक्ति के स्तर और फॉस्फोराइलेशन जैसे संशोधनों का आकलन करना संभव बनाती है। यह पैरामीटर प्रोटीन कार्य और सिग्नलिंग नेटवर्क की बेहतर समझ में योगदान देता है।
* झिल्ली तरलता (Membrane fluidity): फ्लो साइटोमेट्री झिल्ली विशेषताओं के प्रति संवेदनशील प्रतिदीप्त प्रोब का उपयोग करके झिल्ली तरलता का पता लगा सकती है। यह पैरामीटर कोशिका झिल्ली की गतिशीलता और कार्य के बारे में जानकारी देता है।
* कुल डीएनए और आरएनए सामग्री: फ्लो साइटोमेट्री कोशिकाओं में कुल डीएनए और आरएनए सामग्री को माप सकती है। यह डेटा कोशिका चक्र विश्लेषण, प्रसार जांच और जीन अभिव्यक्ति परिवर्तनों को निर्धारित करने के लिए उपयोगी है।
* इंट्रासेल्युलर पैरामीटर्स की निगरानी: इंट्रासेल्युलर कारकों को फ्लो साइटोमेट्री द्वारा मापा जा सकता है, जिसमें pH, इंट्रासेल्युलर आयनित कैल्शियम और मैग्नीशियम स्तर, झिल्ली क्षमता, ग्लूटाथियोन स्तर और ऑक्सीडेटिव बर्स्ट शामिल हैं। ये डेटा कोशिकीय चयापचय, सिग्नलिंग और [[oxidative stress|ऑक्सीडेटिव तनाव]] के बारे में जानकारी प्रदान करते हैं।
* प्रकाश प्रकीर्णन (Light scattering): फॉरवर्ड स्कैटर (FSC) और साइड स्कैटर (SSC) माप का उपयोग फ्लो साइटोमेट्री में क्रमशः कोशिका आयतन और रूपात्मक जटिलता का आकलन करने के लिए किया जाता है। ये मेट्रिक्स कोशिकाओं के आकार, दानेदारपन (granularity) और आकृति का वर्णन करते हैं।
* ट्रांसजेनिक उत्पाद: फ्लो साइटोमेट्री इन विवो (in vivo) ट्रांसजेनिक उत्पादों का आकलन करने के लिए उपयोगी है, विशेष रूप से ग्रीन फ्लोरोसेंट प्रोटीन (GFP) या समान विविधताओं जैसे प्रतिदीप्त प्रोटीन। यह वैज्ञानिकों को जीन अभिव्यक्ति, प्रोटीन स्थानीयकरण और कोशिकीय गतिशीलता की जांच करने में सक्षम बनाता है।
* विभिन्न संयोजन: फ्लो साइटोमेट्री आपको जैविक विशेषताओं और कार्यों की व्यापक समझ प्राप्त करने के लिए डीएनए/सतह एंटीजन जैसे कई मापने योग्य डेटा को एकीकृत करने की अनुमति देती है।

== अनुप्रयोग ==
इस तकनीक के [[molecular biology|आणविक जीव विज्ञान]], [[pathology|पैथोलॉजी]], [[immunology|इम्यूनोलॉजी]], वायरोलॉजी,<ref>(February 2018). "Flow virometry as a tool to study viruses". ''Methods''. 134–135 87–97. doi:[https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2017.12.011 10.1016/j.ymeth.2017.12.011].</ref> [[plant biology|पादप जीव विज्ञान]] और [[marine biology|समुद्री जीव विज्ञान]] सहित कई क्षेत्रों में अनुप्रयोग हैं। इसका [[medicine|चिकित्सा]] में विशेष रूप से प्रत्यारोपण, हेमेटोलॉजी, ट्यूमर इम्यूनोलॉजी और कीमोथेरेपी, प्रसवपूर्व निदान, आनुवंशिकी और [[sex preselection|लिंग पूर्व-चयन]] के लिए [[sperm sorting|शुक्राणु छंटाई]] में व्यापक अनुप्रयोग है। फ्लो साइटोमेट्री का व्यापक रूप से [[male fertility|पुरुष प्रजनन क्षमता]] परख में [[DNA fragmentation|डीएनए विखंडन]] से जुड़ी शुक्राणु कोशिका असामान्यताओं का पता लगाने के लिए उपयोग किया जाता है। साथ ही, इसका उपयोग [[DNA damage|डीएनए क्षति]], कैस्पेज़ क्लीवेज और [[apoptosis|एपोप्टोसिस]] का पता लगाने के लिए अनुसंधान में बड़े पैमाने पर किया जाता है। [[Photoacoustic flow cytometry|फोटोअकॉस्टिक फ्लो साइटोमेट्री]] का उपयोग मल्टी-ड्रग-रेसिस्टेंट बैक्टीरिया (सबसे आम तौर पर MRSA) के अध्ययन में किया जाता है ताकि रंगे हुए बैक्टीरियोफेज के साथ चिह्नित रक्त में बैक्टीरिया का पता लगाया जा सके, अंतर किया जा सके और परिमाणित किया जा सके। [[neuroscience|न्यूरोसाइंस]] में, कोशिका सतह और इंट्रासेल्युलर एंटीजन की सह-अभिव्यक्ति का भी विश्लेषण किया जा सकता है। माइक्रोबायोलॉजी में, इसका उपयोग GFP-एनकोडिंग ट्रांसपोज़ोन (TnMHA) के साथ निर्मित ट्रांसपोज़ोन म्यूटेंट लाइब्रेरी को स्क्रीन और सॉर्ट करने, या जीवनक्षमता का आकलन करने के लिए किया जा सकता है। प्रोटीन इंजीनियरिंग में, फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग [[yeast display|यीस्ट डिस्प्ले]] और [[bacterial display|बैक्टीरियल डिस्प्ले]] के साथ मिलकर वांछित गुणों वाले कोशिका सतह-प्रदर्शित प्रोटीन वेरिएंट की पहचान करने के लिए किया जाता है।
हिस्टोलॉजी और IHC की तुलना में फ्लो साइटोमेट्री के मुख्य लाभ एंटीजन की मात्रा को सटीक रूप से मापने की संभावना और प्रत्येक कोशिका को कई एंटीबॉडी-फ्लोरोफोर्स के साथ दागने की संभावना है, वर्तमान प्रयोगशालाओं में प्रत्येक कोशिका से लगभग 10 एंटीबॉडी बांधे जा सकते हैं। यह मास साइटोमीटर की तुलना में बहुत कम है जहां वर्तमान में 40 तक मापा जा सकता है, लेकिन अधिक कीमत और धीमी गति पर।

=== जलीय अनुसंधान ===
जलीय प्रणालियों में, फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग स्वतः-प्रतिदीप्त (autofluorescing) कोशिकाओं या उन कोशिकाओं के विश्लेषण के लिए किया जाता है जिन्हें अतिरिक्त रंजकों (stains) के साथ प्रतिदीप्त-लेबल किया गया है। यह शोध 1981 में शुरू हुआ जब [[क्लैरिस येन्त्श]] (Clarice Yentsch) ने रेड टाइड उत्पन्न करने वाले डाइनोफ्लैगेलेट में प्रतिदीप्ति को मापने के लिए फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग किया।<ref>(1981). "Flow cytometric analysis of cellular saxitoxin in the dinoflagellate Gonyaulax tamarensis var. excavata". ''Toxicon''. 19 (5) 611–21. doi:[https://doi.org/10.1016/0041-0101(81)90099-4 10.1016/0041-0101(81)90099-4].</ref> अगले वर्ष शोधकर्ताओं ने कई शैवाल प्रजातियों के फ्लो साइटोमेट्रिक माप प्रकाशित किए, जिन्हें उनकी प्रतिदीप्ति विशेषताओं के आधार पर अलग किया जा सकता था। 1983 तक, समुद्री शोधकर्ता अपने स्वयं के फ्लो साइटोमीटर असेंबल कर रहे थे या बरमूडा के तट पर एकत्र किए गए समुद्री जल के नमूनों पर व्यावसायिक रूप से उपलब्ध फ्लो साइटोमीटर का उपयोग कर रहे थे, ताकि यह प्रदर्शित किया जा सके कि फाइटोप्लांकटन कोशिकाओं को निर्जीव सामग्री से अलग किया जा सकता है और साइनोबैक्टीरिया को एक मिश्रित समुदाय से छांटकर बाद में प्रयोगशाला में संवर्धित (cultured) किया जा सकता है। फ्लो साइटोमेट्री ने समुद्री शोधकर्ताओं को मंद-प्रतिदीप्त ''[[प्रोक्लोरोकोकस]]'' (Prochlorococcus) और हेटरोट्रॉफिक सूक्ष्मजीवों के बीच अंतर करने में भी सक्षम बनाया, एक ऐसा अंतर जो माइक्रोस्कोपी-आधारित आकलन के साथ कठिन है। प्रौद्योगिकी में प्रगति अब जलीय वैज्ञानिकों को अनुसंधान यात्राओं के दौरान लगातार फ्लो साइटोमीटर का उपयोग करने की अनुमति देती है और फ्लो साइटोमीटर का उपयोग व्यक्तिगत फाइटोप्लांकटन कोशिकाओं की छवियां प्रदान करने के लिए किया जाता है। समुद्री वैज्ञानिक कोशिकीय गतिविधि और विविधता के सटीक माप लेने, निकटता में रहने वाले सूक्ष्मजीवों के बीच पारस्परिक संबंधों की जांच करने और समुद्र में कई प्रक्रियाओं की जैव-भू-रासायनिक दरों को मापने के लिए फ्लो साइटोमीटर की छंटाई क्षमता का उपयोग करते हैं।

=== कोशिका प्रसार परख (Cell proliferation assay) ===
कोशिका प्रसार (Cell proliferation) प्रतिरक्षा प्रणाली में प्रमुख कार्य है। अक्सर कुछ निष्कर्ष निकालने के लिए कोशिकाओं की प्रसार प्रकृति का विश्लेषण करना आवश्यक होता है। कोशिका प्रसार को निर्धारित करने के लिए ऐसी ही एक परख ट्रैकिंग डाई कार्बोक्सीफ्लोरेसिन डायसेटेट सक्सिनिमिडिल एस्टर (CFSE) है। यह प्रसार करने वाली कोशिकाओं की निगरानी में मदद करती है। यह परख समय-श्रृंखला प्रयोगों के दौरान मात्रात्मक और गुणात्मक डेटा प्रदान करती है।<ref name="pmid17853861">(2007). "Measuring lymphocyte proliferation, survival and differentiation using CFSE time-series data". ''Nature Protocols''. 2 (9) 2057–67. doi:[https://doi.org/10.1038/nprot.2007.297 10.1038/nprot.2007.297].</ref> यह डाई कोशिका के अंदर मौजूद दीर्घकालिक अणुओं के साथ सहसंयोजक रूप से जुड़ जाती है। जब कोशिकाएं विभाजित होती हैं, तो अणु भी विभाजित हो जाते हैं, और संतति कोशिकाओं (daughter cells) में मूल आबादी की तुलना में आधी डाई होती है। तीव्रता में इस कमी को फ्लो साइटोमेट्री द्वारा देखा जा सकता है। साहित्य में, फ्लो साइटोमेट्री और CFSE की इस शक्तिशाली तकनीक का उपयोग ल्यूकेमिया जैसे कैंसर में लक्ष्य कोशिकाओं को मारने में टी-कोशिकाओं (T-cells) की दक्षता का पता लगाने के लिए किया गया है। लक्ष्य कोशिका मृत्यु, तीव्र और धीमी दोनों, को देखने के लिए, वैज्ञानिकों ने कुछ प्रकार की कोशिकाओं की एंटीबॉडी स्टेनिंग और प्रतिदीप्त-लेबल वाले माइक्रोबीड्स के साथ CFSE लेबलिंग का उपयोग किया है। इसने कुछ साइटोकिन्स के उपचार पर लक्ष्य कोशिकाओं के प्रसार के संबंध में भी जानकारी दी।

=== जीनोम आकार मापना ===
फ्लो साइटोमेट्री का उपयोग [[जीनोम आकार]] को मापने के लिए किया गया है, या अधिक सटीक रूप से: एक [[कोशिका (जीवविज्ञान)|कोशिका]] या [[कोशिका केंद्रक|केंद्रक]] में [[DNA]] की मात्रा। हालांकि जीनोम का विश्लेषण [[संपूर्ण जीनोम अनुक्रमण|जीनोम अनुक्रमण]] द्वारा अधिक सटीकता के साथ किया जा सकता है, लेकिन [[माइक्रोक्रोमोसोम]] या [[पुनरावृत्त अनुक्रम (DNA)|पुनरावृत्त अनुक्रमों]] के उच्च अंश के कारण यह अक्सर कठिन होता है, जो अनुक्रमण द्वारा छूट सकते हैं (या विश्लेषण चरण के दौरान फ़िल्टर हो जाते हैं जब उन्हें [[गुणसूत्र]]ों के लिए निर्दिष्ट नहीं किया जा सकता है)। हालांकि, फ्लो साइटोमेट्री भी एकदम सही नहीं है। परिणामी जीनोम आकार उपयोग की गई डाई के आधार पर भिन्न हो सकते हैं। मछली जीनोम के एक विश्लेषण के परिणामस्वरूप काफी अलग जीनोम आकार प्राप्त हुए जब क्रमशः [[प्रोपीडियम आयोडाइड]] (PI) और [[DAPI]] का उपयोग किया गया। उदाहरण के लिए, ''[[जापानी ईल|एंगुइला जपोनिका]]'' (Anguilla japonica) के जीनोम में PI के साथ 1.09 pg DNA और DAPI के साथ 1.25 pg DNA पाया गया। इसी तरह, ''[[चीनी हाई-फिन बैंडेड शार्क|मिक्सोसाइप्रिनस एशियाटिकस]]'' (Myxocyprinus asiaticus) के जीनोम में 2.75 pg DNA (PI) बनाम 3.08 pg (DAPI) पाया गया। यानी, अंतर 12–14% के क्रम का था।<ref>(2012). "Flow cytometric determination of genome size for eight commercially important fish species in China". ''In Vitro Cellular & Developmental Biology. Animal''. 48 (8) 507–517. doi:[https://doi.org/10.1007/s11626-012-9543-7 10.1007/s11626-012-9543-7].</ref>

==नोट्स==
<references group="note" />

== संदर्भ ==
<references />

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''स्रोत:'' अंग्रेज़ी विकिपीडिया के “Flow cytometry” लेख का अनुवाद।
''मूल लेख:'' https://en.wikipedia.org/wiki/Flow_cytometry
''यह अनुवाद स्वचालित रूप से तैयार किया गया है।''